產(chǎn)品描述
注冊信息
Sanger測序,也稱為雙脫氧鏈終止法(Dideoxy Chain Termination Method),是由Frederick Sanger及其同事在1977年開發(fā)的***種用于確定DNA序列的方法。盡管這種方法已經(jīng)被高通量測序技術(shù)部分取代,但它仍然被廣泛應(yīng)用于小規(guī)模的基因測序、驗證下***代測序(NGS)結(jié)果以及克隆質(zhì)粒等場景中。
傳統(tǒng)的Sanger測序過程涉及以下幾個步驟:
PCR擴增:***先,目標DNA片段需要與引物***起進行PCR擴增。
鏈終止反應(yīng):接下來,在四個獨立的反應(yīng)體系中分別加入***定比例的四種常規(guī)脫氧核苷酸(dNTPs)和***種標記了熒光染料或放射性同位素的雙脫氧核苷酸(ddNTPs),每種反應(yīng)體系包含不同的ddNTP。當***個ddNTP被聚合酶添加到正在生長的DNA鏈上時,該鏈的增長就會停止,因為缺少3'-OH基團。
電泳分離:隨后,所有反應(yīng)產(chǎn)物混合后通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)或毛細管電泳根據(jù)大小分離這些不同長度的DNA片段。
讀取序列:***后,通過檢測每個片段末端標記的信號來確定其對應(yīng)的堿基類型,并由此推斷原始DNA模板的序列。
現(xiàn)代的Sanger測序儀,如Applied Biosystems公司的3500系列遺傳分析儀,已經(jīng)實現(xiàn)了自動化操作流程,包括自動進樣、電泳、數(shù)據(jù)收集和初步分析。
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