采用點(diǎn)光源照射標(biāo)本,在焦平面上形成***個輪廓分明的小的光點(diǎn),該點(diǎn)被照射后發(fā)出的熒光被物鏡收集,并沿原照射光路回送到由雙向色鏡構(gòu)成的分光器。分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有***個針孔,分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸***致,約100-200nm;相對于焦平面上的光點(diǎn),兩者是共軛的,即光點(diǎn)通過***系列的透鏡,***終可同時聚焦于照明針孔和探測針孔。這樣,來自焦平面的光,可以會聚在探測孔范圍之內(nèi),而來自焦平面上方或下方的散射光都被擋在探測孔之外而不能成像。以激光逐點(diǎn)掃描樣品,探測針孔后的光電倍增管也逐點(diǎn)獲得對應(yīng)光點(diǎn)的共聚焦圖像,轉(zhuǎn)為數(shù)字信號傳輸至計(jì)算機(jī),***終在屏幕上聚合成清晰的整個焦平面的共聚焦圖像。
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