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核酸提取方法有哪些
發布時間:2024-10-24 09:35:12

常用方法:

1、直接提取法,也稱鳥槍法。

2、人工合成法:A反轉錄法,B化學合成法。

具體方法:

1、濃鹽法

2、陰離子去污劑法

3、酚/氯仿抽提法

4、水抽提法

5、醇沉淀法

6、熱裂解堿法

7、煮沸裂解法

8、納米磁珠法

9、還有超聲法、反復凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。

實驗室常用的DNA提取方法:

1、Chelex100法:在提取DNA時,加入Chelex100(由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成,含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子,起著螯合基團作用,對多價金屬離子有極強親和力),螯合了金屬離子,防止了DNA降解,提高了PCR擴增成功率。

2、有機法:指用平衡酚(又叫飽和酚)、氯仿等按不同比例混合,采用不同方法提取DNA。

3、磁珠法:(異)硫氰酸胍(GuSCN)是強烈蛋白變性劑,不破壞蛋白質一級結構,能破壞細胞膜及核膜蛋白,并使核酸酶失活,釋放DNA。磁珠可以特異性吸附DNA,與DNA結構及片段大小無關。

4、鹽析法:溶解紅細胞后,離心沉渣用PK消化,用大約6M飽和NaCl沉淀蛋白質,離心上清中DNA用無水乙醇沉淀,用TE溶解。

5、NaOH法:強堿溶解、變性蛋白質,破壞細胞膜及核膜,變性核酸酶,釋放DNA,NaOH不破壞DNA一級結構。

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